软下疳通常通过特征性的皮损表现，以及患者的不洁性生活的经历，就可以进行确定诊断。

但是，如果患者对软下疳诊断表示怀疑，也可以进一步做实验室检查来进行确诊。比如可以取软下疳溃疡部位的分泌物，将其放于显微镜下涂片来查找病原菌，或者是做分泌物的培养检查以及药物敏感实验。

另外，也可以检测血常规，如果白细胞或中性粒细胞升高、C反应蛋白升高、淀粉样蛋白升高，都能够从侧面反映出患者患有软下疳。当然也可以做组织病理学检查，不过并不列为首选。软下疳是一种少见的性传播疾病，具有其特殊的病原体。诊断方面，除了临床特征之外，需要结合实验室检查，给予规范的抗炎治疗。