检查黄体酮的最佳时间是在正常月经周期女性的第21天左右。

排卵后，当循环中垂体分泌的促黄体素和促卵泡素急剧下降。在少量的促黄体素和促卵泡素的作用下黄体形成，并且逐渐地发育成熟。黄体主要分泌孕激素、黄体酮，也可以分泌雌二醇，使得子宫内膜发生分泌期变化。排卵后第7~8天在循环中的孕激素可以达到高峰，雌激素也可以达到又一个高峰，这个时期应该在月经的第21~22天左右。

由于大量的孕激素和雌激素，以及抑制素A的共同负反馈的作用，又可以使得垂体促卵泡数和促黄体素的分泌相应减少。黄体开始萎缩，雌孕激素分泌减少，子宫内膜失去性激素的支持就会发生剥脱，而导致月经来潮。雌孕激素和抑制素A的减少，解除对下丘脑和垂体的负反馈抑制，使得促黄体素和促卵泡素分泌增加，卵泡开始发育，下一个月经周期重新开始。