首先取新鲜清洁中段尿，接种于支原体培养基，在适宜的培养条件下支原体已被分离，当发现有菌落生长时应做同行特异性的抗体抑制试验，已做支原体的分享。

实验室诊断，支原体感染的使用方法可用支原体制成抗原与患者血清做补体结合试验在疾病的后期，血清补体结合抗体低。比初期升高4倍以上，有诊断的意义。

同时，应该进行利用dna探针进行核酸。印记实验诊断生殖道支原体感染，其敏感稍差。