支原体的检查主要是取分泌物做冷凝集试验或者培养，还可以抽血进行血清学检查。通常支原体感染可导致白细胞和中性粒细胞总数的增加。

在冷凝集试验中支原体的滴度会逐渐增加，也可以进行支原体抗原的检测，血清学检查是支原体和衣原体的最常见检查。

通过检测特异性IgM和IgG抗体进行诊断，一般效价将高于1:32，还可以通过咽部检查，病理组织分泌物等检测病原体，如果需要，可以培养和分离病原体，这对于鉴别诊断具有决定性意义。