支原体培养通常需要5至14天，具体时间取决于样本类型、支原体种类及培养条件。快速生长的支原体可能在5-7天内检出，而生长缓慢的菌株可能需要更长时间。临床常用的液体培养基结合指示系统如酚红变色可初步判断生长情况，但确诊需通过固体培养基观察典型煎蛋样菌落。分子检测技术如PCR可缩短检测周期，但培养法仍是金标准。
支原体培养的关键在于选择适宜的培养基和培养环境。支原体缺乏细胞壁，需在富含胆固醇、蛋白质和核酸前体的特殊培养基中生长，如SP-4或PPLO培养基。培养环境需保持5%-10%的CO₂浓度，温度控制在35-37℃。临床样本如咽拭子、泌尿生殖道分泌物需尽快送检，避免干燥或污染。液体培养基中支原体代谢活动可导致pH变化，表现为颜色改变，此时需转种至固体培养基进一步分离鉴定。部分耐药菌株或混合感染可能延长培养时间，需结合药敏试验指导治疗。
注意事项包括严格无菌操作以避免细菌或真菌污染。样本采集应避开消毒剂残留，运输过程中使用专用转运培养基。培养过程中需定期观察，避免过度晃动影响支原体吸附。阴性结果需持续培养至14天方可确认，尤其对慢性感染或免疫抑制患者。实验室应配备生物安全柜，防止气溶胶传播。临床解读需结合症状和其他检测结果，因支原体培养敏感性仅为60%-80%，必要时需联合血清学或分子检测提高检出率。
